paclitaxel是什么意思litaxel在线翻译读音

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紫杉醇对

Raji

细胞的作用:

G2/

M

期阻滞和细胞凋亡*

周晓燕 许良中 朱伟萍 张泰明

(上海医科大学附属肿瘤医院分子病理研究室,上海200032)

摘要 目的 观察微管稳定剂紫杉醇对淋巴瘤Raji细胞的作用。 方法 检测紫杉醇对Raji细胞作用的时间

效应和剂量效应;在光镜剑荡江湖 和电镜下观察形态变化;用流式细胞仪分析细胞周期的改变。 结果和结论 紫杉醇对淋

巴瘤Raji细胞的增殖有明显抑制作用,4Lg/ml紫杉醇作用48h细胞生长抑制率达82.6%,形态学及流式细胞仪分

析显示

G2

/

M

期阻滞和细胞凋亡。这一作用机制将为临床治疗提供理论依据。

关键词 淋巴瘤 肿瘤细胞,培养 紫杉醇

THEEFFECTSOFTAXOLONRAJICELLS

:

G2

/

MARRESTSANDAPOPTOSIS

Zhou南北朝是什么朝代 Xiaoyan

,

Xu

Liangzhong,ZhuWeiping,toryofMolecularPathology,CancerHospital,ShanghaiMedicalUniversi-路从今夜白小说墨舞碧歌

ty,Shanghai200032

PURPOSE S Timeanddoseef-

fectsoftaxolweredetected

,

morphologicchangesunderlightmicroscopeandelectronmicroscopewereobserved

,

alterationofcellcyclewereanalysedusingflowcytometry

.

RESULTSANDCONCLUSION

Taxolcaninhibitthe

eofcellgrowthinhibitionis82.6%treatedwith4Lg/ls

showG

2

/hnismsoftaxolprovidetheoreticalguidanceforclinicaltreatments.

KEYWORDS Lymphoma Tumorcells,cultured Paclitaxel

*该课题由上海市医学领先专业95-Ⅲ002资助

紫杉醇(Taxol,paclitaxel)是从太平洋紫杉属

短叶紫杉茎皮中提取的新型抗癌药,体外研究表明

它对卵巢癌、乳腺癌、小细胞肺癌、恶性黑素瘤和白

血病等多种恶性肿瘤细胞具有抑制作用,临床应用

显示对这些肿瘤具有治疗效果,它能与微管结合使

微管稳定性增强,抑制微管解聚,使细胞周期阻滞于

分裂期[1]。在早幼粒白血病细胞和人卵巢癌细胞还

可诱发细胞凋亡[2]。临床上对常规治疗效果不好的

淋巴瘤患者也使用紫杉醇,但紫杉醇对淋巴瘤细胞

的作用及作用机制尚不清楚,因此对此进行研究具

有重要的理论价值和临床指导意义。

材料和方法

一、细胞培养及药物

选用人EB病毒阳性的Burkitt淋巴瘤Raji细

胞株,细胞在含15%小牛血清(杭州四季青生物工

程研究所生产)的

RPMI

1640(

Gibco

公司产品)培

养液中生长,培养箱中CO2浓度为5%、温度37

℃、饱和湿度,紫杉醇(Bristol-MyersSquibb公司产

品)原液浓度6

mg

/

ml

,工作浓度为0.05

Lg

/

ml

～10

Lg/ml。

二、药物抑制的时间效应与剂量效应

收集对数生长期约2105/

ml

细胞1

ml

接种

于24孔板,常规条件下培养24h后加入紫杉醇使

其终浓度为4Lg/ml,继续培养,分别在3h、12h、24

h

、48

h

、72

h

计数;或加入不同浓度(0.01

Lg

/

ml

、

0.05

Lg

/

ml

、0.5

Lg

/

ml

、4

Lg

/

ml

、10

Lg

/

ml

)的药物

继续培养48h后计数,每组设3个复孔。

细胞生长抑制率(%)=

对照组活细胞数-实验组活细胞数

对照组活细胞数

100%

三、细胞形态学观察

(一)倒置显微镜及台盼蓝试验观察活细胞形态

第8卷 第2期

1998年6月

中国癌症杂志

CHINAONCOLOGY

Vol.8,No.2

Jun.1998

特征。

(二)收集细胞均匀涂片,丙酮固定后进行HE

或Giemsa染色。

(三)收集大于106细胞按常规程序固定处理,

经枸橼酸、醋酸铀染色后在透射电镜下观察细胞的

超微结构特征。

四、流式细胞计量术(

FCM

)分析

收集约2106细胞,70%酒精固韩信为什么看不起白起 定,1%

Triton

X-10010ml处理10min,0.01%RNA酶1ml处

理10min,0.25%碘化丙锭(PI)染色20min,上机

分析。流式细胞仪(

Facscalibur

)为

Becton

-

Dickin-

son公司产品。汞激发波长为488nm,每样品随机分

析1105细胞,分析软如梦令秋愁 件为Modfit。

结 果

一、紫杉醇对Raji细胞的抑制效应

4

Lg

/

ml

浓度紫杉醇与

Raji

细胞一起温育3

h

、

12h、24h、48h、72h,时间效应显示紫杉醇对细胞

生长抑制率分别为5.0%、8.8%、73.0%、82.6%、

93.6%,不同浓度0.01Lg/ml、0.05Lg/ml、0.5Lg/

ml

、4

Lg

/

ml

、10

Lg

/

ml

紫杉醇分别与

Raji

细胞温育

48h,剂量效应显示紫杉醇对细胞生长抑制率分别

为5.1%、36.7%、77.2%、82.6%、87.2%。

二、药物作用后的形态学改变

(一)倒置显微镜下可见细胞在一定浓度(0.05

Lg/ml～6Lg/ml)药物,一定时间(3～48h)作用后

透亮性下降,并见颗粒,但台盼蓝试验阴性。

(二)

HE

染色及电镜观察显示未经处理的

Raji

细胞核呈圆形,核浆比例大,核分裂少,无双核或多

核。药物作用后大部分细胞核膜消失呈爆炸式核分

裂,部分细胞核染色质固缩或断裂成多个致密小体,

此为凋亡细胞(见图1,2),另外可见双核或多核细

胞。

三、流式细胞计量术分析

紫杉醇作用后可见

G1期细胞逐渐减少,

G2/

M

期细胞逐渐增加,并在G1峰前出现亚二倍体峰即凋

亡小峰。如2Lg/ml紫杉醇作用48h后G1期细胞

由对照组(未用紫杉醇)34.75%降至2.04%,而

G2/

M

细胞由对照组的12.10%增至74.14%,在

G1

期前出现5.73%的凋亡细胞(见图3)。

图1 Raji细胞在紫彬醇作用后的光镜特征(HE400)

↑:分裂期细胞;R:凋亡细胞

图2

Raji

细胞在紫彬醇作用后细胞核凝集,断裂成致密小

体,细胞膜、细胞器完整(900)

图3 Raji细胞流式细胞分析(左:未用紫杉醇处理。G

0

/G

1

34.75%,G

2

/M12.10%,AP1.09%,右:2Lg/ml紫杉

醇作用16

h

。

G0

/

G1

2.04%,

G2

/

M

74.14%,

AP

5.73%

109 2期 紫杉醇对Raji细胞的作用:G

2

/M期阻滞和细胞凋亡*

讨 论

微管是调控细胞有丝分裂、细胞形态和细胞内

物质转运的细胞器。微管稳定剂紫杉醇的作用是:

使细胞阻滞于分裂期;使肿瘤细胞的运动能力下

降,抑制其侵袭性[3];使细胞内

bcl

-2磷酸化,导致

bcl

-2/

bax

异二聚体减聚,

bax

/

bax

增多,从而促进

细胞凋亡[4]。本研究首次观察紫杉醇对人恶性淋巴

瘤Raji细胞的作用,结果表明紫杉醇对Raji细胞具

有明显抑制作用,其作用机制主要表现在

G2/

M

期

阻滞和一定数量的细胞凋亡。这使紫杉醇应用于淋

巴瘤治疗具有理论依据并可指导该药的联合应用,

例如处于分裂期细胞比其他期细胞对放疗更为敏

感,因此使用紫杉醇后联合放疗可使患者获得更好

的治疗效果。文献[5]报道紫杉醇对31%的中度恶性

淋巴瘤、14%的低度恶性淋巴瘤和17%的套细胞淋

巴瘤有作用,在中度恶性淋巴瘤中对复发和难治性

淋巴瘤高度敏感,因此可选择紫杉醇作为这些类型

淋巴瘤治疗的有效药物之一。

紫杉醇易诱导白血病细胞,卵巢癌细胞进入细

胞凋亡,动物实验表明紫杉醇对淋巴瘤比对腺癌、鳞

癌、肉瘤更易诱导细胞凋亡[6]。在我们的实验中紫杉

醇诱导Raji进入细胞凋亡的比例不高(<8%),细

胞凋亡的特征之一

DNA

梯型图谱不易显示。关于

紫杉醇对不同肿瘤、同一肿瘤不同个体或不同环境

下的肿瘤细胞反应性不同的原因尚不清楚,可能与

细胞内在的基因状态如p53、bcl-2基因家族、c-myc

等的表达水平有关[7],也与细胞所处的环境如激素、

细胞因子等水平有关[8]。Raji为EB病毒阳性的细

胞株,EB病毒潜在膜蛋白LMP-1与bcl-2同源,其

本身或通过诱导

bcl

-2可抑制细胞凋亡[9],这可能是

Raji细胞在紫杉醇作用下细胞凋亡少的原因之一。

由于细胞凋亡与药物抑制作用具有相关性[6],而且

使肿瘤细胞发生凋亡是治疗的最终目的,因此对于

紫杉醇对

EB

病毒阴性的淋巴瘤细胞的作用、细胞

凋亡的调控机制及如何促进淋巴瘤细胞凋亡尚需进

一步深入的研究。临床上用紫杉醇治疗淋巴瘤时,应

注意到患者是否有

EB

病毒感染以及肿瘤细胞的基

因状态,这可能是与药物疗效有关的重要因素。

参考文献

1 SarosyG,KohnE,StoneDA,studyoftaxoland

granulocytecolonystimulatingfactorinpatientswithrefractory

ncol,1992,10:1165

2 BhallaK,IbradoAM,TourinaE,nducesinternucle-

osomalDNAfragmentationassociatedwithprogrammedcell

ia,1993,7:563

3

VerschuerenH

,

DewitJ

,

De

-

BraekleerJ

,

etal

.

Mortalityandin-

vasivepotencyofmurineT-lymphomacells:effectofmicrotubule

olInt,1994,18:11

4 HaldauS,ChintaplliJ,nducesbcl-2phospho-

Res,1996,56:

1253

5 Youn人生若只如初见全文 esA,SarrisA,MelnykA,-hourpaclitaxelinfu-

sioninpatientswithrefractoryandrelapsednon-Hodgkin\'slym-

ncol,1995,13:583

6 MilrossCG,MasonKA,HunterNR,onshipofmitotic

arrestandapoptosistoantitumoraffectofpaclitaxel

.

JNatl

CancerInst,1996,88:1308

7 KerrJF,WinterfordCM,nificance

,1994,73:2013

8 ,

1992,356:397

9 HedersonS,RoweM,GregoryC,ionofbcl-2expres-

sionbyEpstein-Barrviruslatentmembraneproteinprotectsin-

,1991,65:1107

(收稿日期:1997-06-10 修回日期:1997-07-25)

110 中 国 癌 症 杂 志 8卷