心肌损伤生化标志物的研究进展否的论文

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篇1：心肌损伤生化标志物的研究进展否的论文

关于心肌损伤生化标志物的研究进展否的论文

选择能早期诊断缺血性心肌损伤的生化标志物是检验医学的一项重要工作，这是因为不少研究都指出溶栓治疗的疗效和进行治疗时间的早晚密切相关。Rawles曾估计每延迟治疗1 h有可能增加30 d死亡率21‰。但另一方面溶栓治疗有一定危险性，可引起脑出血等严重合并症，只凭经验或临床征状就冒然进行溶栓治疗显然也是不恰当的。美国心脏学会在其提出的“急性心肌梗死（AMI）患者治疗导则”中认为只有当急性心肌梗死患者心电图出现ST段上升时，才考虑给以溶栓治疗，这种提法似乎保守一些，有可能漏掉一些征状不典型但却应该进行溶栓治疗的患者。所以如果检验工作者能够找出一些更有效的心肌损伤早期生化标志物，无疑会给临床以莫大的帮助。

在以往寻找心肌损伤生化标志物的工作中，往往集中在寻找由于心肌坏死后，释放出来的心脏特异的酶或蛋白质。心肌胞质中的小分子蛋白比结构蛋白更容易进入血循环。现已证实肌红蛋白（相对分子质量17 000）以及CK-MB亚型,即MB1/MB2比值是目前公认的2个早期生化标志物。但是坏死病变不是患病后立刻出现的，在坏死出现前先经过一个可逆的缺氧阶段。所以如果只注意检查坏死损伤所释放的物质，很难在发病后短时间内查出心肌损伤病变。

近年来对于急性缺血性心脏病的病理生理有了更多的了解，不仅认识到稳定性心绞痛的发生和动脉壁的粥样斑块形成有关，还认识到斑块破裂是病变发展的基本因素。Fuster等认为，冠状动脉心脏病的发展有2个阶段，第一阶段是动脉粥样斑块的形成，此斑块表面有一完整的纤维帽，上面覆盖一层内皮细胞，此时患者往往无征状或在劳动缺氧时出现心绞痛。第二阶段则是由于斑块破裂引起一系列病变：如内皮细胞功能下降；脂质进入血管壁；出现炎症病变，单核细胞转化为活化的巨噬细胞；低密度脂蛋白被氧化形成氧化低密度脂蛋白；产生生长因子，反过来损伤内皮细胞，释放多种血栓形成因子，如：vW因子、V因子等。所有这些因素，再加上血小板活化，极可能形成冠状动脉血栓。血栓的形成是多种作用如血液流体力学、血管壁各种因子成份、血小板活化、血凝和纤溶系统等相互影响、平衡的结果。

一旦血栓形成，冠状动脉血流受限可能引起心肌缺血，出现不稳定心绞痛，病情进一步发展或者直接出现急性心肌梗死。一般认为Q波心梗往往与冠状动脉完全阻塞有关，无Q波心肌梗死的冠状动脉常出现血管不完全栓塞。

根据上述理论，Wu等提出一些可能成为冠状动脉心脏病早期病变的标志物。见表1。表1中大部分标志物都出现在目前公认的心肌坏死标志物之前。表中标志物有一部分可能成为冠心病的早期诊断指标。但缺点也是明显的，因为它们大多数只表示存在炎症或血栓等病理变化，并不意味一定存在心肌坏死。同时这些指标很难鉴别诊断不稳定心绞痛和急性心肌梗死。但无论如何这些指标变化对于冠心病的治疗是很有价值的，临床医师可以针对患者的这些病变，采取及时的对症治疗，防止病变的进一步发展。下面对列举的标志物作一介绍。

标志物 病理生理和/ 或生化作用 相对分子质量 临床用途

C反应蛋白（CRP） 急性相蛋白 115 000- 140 000 感染标志物

血栓前体 蛋白（TpP） 促使形成不溶性纤维蛋白的蛋白质 >300 000 早期检查栓塞形成

P-选择素 活化血小板 140 000 检查血小板聚集

糖原磷酸 化酶BB 缺血引起糖原 分解 188 000 缺血早期标志物

脂肪酸结合蛋白 携带脂肪酸的 蛋白 15 000 排除AMI

α-肌动蛋白 和肌肉收缩 有关 43 000 心肌损伤

脑型钠尿激素 钠利尿激素 4 000， 10 000 左心功能衰竭 敏感指标

一、感染标志物

一些作者认为，感染在冠心病的发生发展中起着重要的作用。在动脉粥样斑块组织中能见到单核细胞、巨噬细胞和T淋巴细胞的浸润，在不稳定心绞痛患者的斑块中此种病变比稳定性心绞痛更为明显，在斑块破裂处特别在肩角区吞噬细胞更多。吞噬细胞能产生金属蛋白酶，分解粥样斑 块纤维帽中的成份，使纤维盖变薄变弱，易引起斑块的破裂。检查血清中的感染指标如急性反应相蛋白有助于早期查出冠状动脉疾病（CAD）的病变发展，有助于临床医生采取相应的治疗措施。目前测定较多的有C反应蛋白（CRP），多用免疫比浊法，其参考值为68～8 200 μg/L，发现AMI患者血清中CRP升高，其升高程度和梗死面积大小相关。不稳定性心绞痛患者的阳性率高低和患者并发症和猝死率相关。除CRP急性反应相蛋白外，还有纤维蛋白原在AMI也升高，最近甚至有人将纤维蛋白原看成如同胆固醇一样的冠心病危险因子。感染标志物的最大缺点是特异性较差,它们的升高还见于其它感染,损伤和肿瘤等多种病变。

二、血栓形成标志物

1．血栓前体蛋白（TpP）：AMI的主要病理变化是血栓形成，如果在CAD患者血中查出形成栓塞的各种因子活动度增高，无疑有助于CAD的诊断和治疗。反之如果没有任何变化能说明患者存在着活跃的血栓病变，则几乎可以排除AMI的诊断。血栓前体蛋白（TpP）是血凝过程中一个重要产物，血栓形成时不可避免会升高。初步对21例发病6 h内的AMI患者进行测定，TpP都出现升高，而不少例CK-MB还在正常范围。用肝素治疗后TpP明显下降，停止治疗后TpP又升高。TpP测定的缺点是特异性较差,除AMI外还见于其它栓塞疾病如深部静脉栓塞、肺梗死和脑血管意外等。

2．p-选择素（P-selectin）：血小板聚集在血栓形成中起重要作用，在激动剂如二磷酸腺苷、凝血酶或花生四烯酸等作用下，促使血小板附着在血管壁，随后通过血小板膜糖元Ⅱb/Ⅲa受体和纤维蛋白元结合，促使血小板相互聚集。在这一过程中有一种物质即GMP-140或者P-选择素，它来自血小板的α颗粒和内皮细胞中的W-P体。其作用为活化血小板和白细胞粘附，促进血栓的'固化。因此选择素被分泌入血可看成血小板被活化，是存在血栓病变的一个较好指标。

目前有关选择素诊断AMI文章不多。有作者报道，不稳定性心绞痛患者在发病1 h后，血中就有选择素升高。而稳定性心绞痛变化不大。测定选择素的临床价值在于可了解患者血小板在疾病病理过程中的作用，特别在考虑是否选用抗血小板药物治疗时以及判断这些治疗的疗效时。P-选择素的测定价值更大。

三、心肌缺血指标

冠状动脉血栓形成将引起相应组织的缺氧和损伤。在开始阶段此损伤是可逆的，如出现再灌注，损伤组织可以恢复正常，但如无再灌注，组织产生不可逆损伤，大分子的酶和蛋白质释放入血。这可逆阶段长短随个体而异，一般认为在出现症状后1～3 h。所以如能早期查出缺血指标，无疑将给临床以很大的帮助。

四、 糖原磷酸化酶BB（GP-BB）

GP是一个二聚体酶，有3种同工酶：GP-BB在心和脑；GP-MM在骨骼肌；GP-LL在肝。现在已有只测定GP-BB的免疫学试剂盒。

从初步结果看，GP-BB早期诊断的优点很明显。一组48例不稳定心绞痛患者有ST段和/或T波变化的18例中［9］，GP-BB、肌红蛋白、cTnT和CK-MB阳性率分别为88%、11%、17%和28%。另一篇文章对22例AMI患者，检查发病2～4 h各项检查的阳性率。也是GP-BB最高，达到83%、肌红蛋白，总CK和CK-MB小于此值，分别为58%、25%和67%。

GB-BB的早期变化，显然很难用坏死来解释，因其相对分子质量很大，为188 000，远远大于肌钙蛋白和CK-MB。用心肌缺氧来说明可能更为合理。心肌缺氧时抑制线粒体中ATP的生成，从而引起一系列代偿反应，其中之一就是GP分解糖元，生成葡萄糖进行无氧糖酵解。正常时GP-BB和糖原形成复合物附着于内质网，缺氧时GP从b型转化为a型同时生成葡萄糖-1-磷酸。GP和糖原分离后，进入细胞浆。当细胞膜因缺氧增高渗透性时，GP-BB极易进入血中，这是因为心肌和血中GP浓度相差很大，所以GP-BB不仅血中浓度升高较早，灵敏度也较高。

五、脂肪酸结合蛋白（FABP）

是一组至少由6种不同相对分子质量组成的蛋白质（14 000～15 000）。存在不同脏器中，心脏中的FABP和肝、小肠中的有明显区别。它是长链脂肪酸的载体，在脂酸酸代谢中起作用，而心脏中的脂肪酸在能量代谢中起重要作用，心肌缺氧时FABP在血中升高，特别由于其分子量小和心肌中含量很高（0.46 mg/g湿重）AMI早期就可查到其升高。有学者在10例AMI患者中发现所有早期标本（发病1.5～4 h）FABP都升高而CK-MB仍在正常范围。另一研究也发现在发病早期阶段（0～3 h）FABP和CK-MB的临床灵敏度分别为91.4%和20%,FABP显著高于CK-MB。

六、坏死标志物

在拙作“生化标志物在缺血性心脏病诊断中的临床价值”一文中对坏死标志物已有了较详细的介绍，特别是肌钙蛋白T和I，此不再叙述。最近人们对α-肌动蛋白给予一定的注意。 α-肌动蛋白是细丝的结构蛋白，相对分子质量43 000。其特点为含量很高，占细胞蛋白库的20％，高出肌钙蛋白和肌球蛋白7倍。所以如果能建立特异性和灵敏度很高的方法。有希望能查出微小的心肌损伤。初步的应用显示有一定的前景，在29例不稳定心绞痛患者中有 19例血中α-肌动蛋白升高。 70例AMI患者阳性率为95%。但可惜同时未查肌钙蛋白和 CK-MB，无法确切判断其实用价值。

篇2：心肌损伤生化标志物的研究进展

心肌损伤生化标志物的研究进展

选择能早期诊断缺血性心肌损伤的生化标志物是检验医学的一项重要工作，这是因为不少研究都指出溶栓治疗的疗效和进行治疗时间的早晚密切相关。Rawles［1］曾估计每延迟治疗1 h有可能增加30 d死亡率21‰。但另一方面溶栓治疗有一定危险性，可引起脑出血等严重合并症，只凭经验或临床征状就冒然进行溶栓治疗显然也是不恰当的。美国心脏学会在其提出的“急性心肌梗死（AMI）患者治疗导则”［2］中认为只有当急性心肌梗死患者心电图出现ST段上升时，才考虑给以溶栓治疗，这种提法似乎保守一些，有可能漏掉一些征状不典型但却应该进行溶栓治疗的患者。所以如果检验工作者能够找出一些更有效的心肌损伤早期生化标志物，无疑会给临床以莫大的帮助。

在以往寻找心肌损伤生化标志物的工作中，往往集中在寻找由于心肌坏死后，释放出来的心脏特异的酶或蛋白质。心肌胞质中的小分子蛋白比结构蛋白更容易进入血循环。现已证实肌红蛋白（相对分子质量17 000）以及CK-MB亚型,即MB1/MB2比值是目前公认的2个早期生化标志物。但是坏死病变不是患病后立刻出现的，在坏死出现前先经过一个可逆的缺氧阶段。所以如果只注意检查坏死损伤所释放的物质，很难在发病后短时间内查出心肌损伤病变。

近年来对于急性缺血性心脏病的.病理生理有了更多的了解，不仅认识到稳定性心绞痛的发生和动脉壁的粥样斑块形成有关，还认识到斑块破裂是病变发展的基本因素。Fuster等［3］认为，冠状动脉心脏病的发展有2个阶段，第一阶段是动脉粥样斑块的形成，此斑块表面有一完整的纤维帽，上面覆盖一层内皮细胞，此时患者往往无征状或在劳动缺氧时出现心绞痛。第二阶段则是由于斑块破裂引起一系列病变：如内皮细胞功能下降；脂质进入血管壁；出现炎症病变，单核细胞转化为活化的巨噬细胞；低密度脂蛋白被氧化形成氧化低密度脂蛋白；产生生长因子，反过来损伤内皮细胞，释放多种血栓形成因子，如：vW因子、V因子等。所有这些因素，再加上血小板活化，极可能形成冠状动脉血栓。血栓的形成是多种作用如血液流体力学、血管壁各种因子成份、血小板活化、血凝和纤溶系统等相互影响、平衡的结果。

一旦血栓形成，冠状动脉血流受限可能引起心肌缺血，出现不稳定心绞痛，病情进一步发展或者直接出现急性心肌梗死。一般认为Q波心梗往往与冠状动脉完全阻塞有关，无Q波心肌梗死的冠状动脉常出现血管不完全栓塞。

根据上述理论，Wu等［4］提出一些可能成为冠状动脉心脏病早期病变的标志物。见表1。表1中大部分标志物都出现在目前公认的心肌坏死标志物之前。表中标志物有一部分可能成为冠心病的早期诊断指标。但缺点也是明显的，因为它们大多数只表示存在炎症或血栓等病理变化，并不意味一定存在心肌坏死。同时这些指标很难鉴别诊断不稳定心绞痛和急性心肌梗死。但无论如何这些指标变化对于冠心病的治疗是很有价值的，临床医师可以针对患者的这些病变，采取及时的对症治疗，防止病变的进一步发展。下面对表1列举的标志物作一介绍。

表1可能成为心肌损伤的早期标志物

标志物 病理生理和/ 或生化作用 相对分子质量 临床用途

C反应蛋白（CRP） 急

[1] [2] [3] [4] [5]

篇3：神经生化标志物S100B的研究进展

神经生化标志物S100B的研究进展

近几年对神经生化标志物的研究已成为热点,在这些生化标志物中,S100B是其中最具有代表性的.它是主要存在于神经胶质细胞中的'特异性蛋白,正常情况下在细胞外液的含量很少,当胶质细胞受损后细胞完整性破坏,可以大量进入细胞外液.

作 者：叶磊 陈礼刚  作者单位：泸州医学院附属医院神经外科,四川泸州,646000 刊 名：泸州医学院学报 英文刊名：JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE 年，卷(期)： 32(3) 分类号：Q421 关键词： 

篇4：谈丹蒌片对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制论文

谈丹蒌片对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制论文

再灌注治疗能快速打开堵塞血管、恢复冠脉血供，是治疗冠心病急性心肌梗死的重要手段，据统计我国2013 年冠状动脉经皮介入术( percutaneouscoronary intervention，PCI) 的病例数超过40 万例，位居世界第2 位。但再灌注治疗只是一种局部治疗，并不能终止冠心病的病理发展进程，加之治疗后出现的一系列心肌缺血再灌注损伤( myocardialischemia reperfusion injury，MIRI) ，严重制约了冠心病的治疗效果。有研究证实，急性心肌梗死( acutemyocardial infarction，AMI) 患者即使接受最佳的再灌注治疗，仍有10% ～ 30%出现MIRI，MIRI 被认为是导致心梗后心力衰竭发生率高达25% 及年死亡率达10% 的主要原因，因此防治MIRI 是临床亟需解决的问题。动物实验发现内皮功能障碍、脂质氧化损伤、炎症反应、钙超载及能量代谢等在MIRI的发生发展中起重要作用。

MIRI 目前临床尚缺乏有效的干预药物，中医药具有作用通路广泛、作用靶点多样的特点，在临床应用中具有独到的优势。丹蒌片是痰瘀同治的上市药物，临床用于治疗各类冠心病心绞痛，临床疗效良好，目前关于丹蒌片的实验研究大都针对心肌梗死后对心脏的保护作用，而对MIRI 后心脏保护作用的研究鲜有报道。课题组前期实验研究发现，丹蒌片能降低大鼠心肌缺血程度，增加离子转运通道相关酶活性，减少短暂心肌缺血再灌注诱导的致命性及非致命性室颤发生率、室性心动过速及室性早搏的发生频率及持续时间。在此基础上，为阐明丹蒌片对已有心肌不可逆坏死的心肌缺血再灌注治疗后的心脏保护作用，本研究观察其对大鼠心肌坏死程度及心脏射血分数的影响，并从内皮功能保护、抑制脂质过氧化及细胞凋亡方面探讨其作用机制，为扩大丹蒌片的临床应用范围提供数据支撑。

1 材料

1. 1 动物清洁级雄性健康Wistar 大鼠80 只，体重( 300 ± 20) g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号SCXK( 京) 2012-0001，在中国中医科学院广安门医院动物中心适应性喂养3 d。

1. 2 药品及试剂丹蒌片( 吉林康乃尔药业有限公司，国药准字Z20050244) ; 羧甲基纤维素钠，2，3，5-氯化三苯基四氮唑( TTC) ，伊文思蓝，水合氯醛( 国药集团化学试剂有限公司，批号分别为20081023，20140507，20140228，20130201) ; 乳酸脱氢酶( LDH) 试剂盒，肌酸激酶同工酶( CK-MB) 试剂盒( 贝克曼库尔特实验系统有限公司，批号分别为AUZ1443，OSR61155) ; 大鼠内皮素( ET) 试剂盒( 北京北方生物技术研究所，批号S20083014) ; 大鼠一氧化氮( NO) ，丙二醛( MDA) 及髓过氧化物酶( MPO) 试剂盒( 南京建成生物工程研究所，批号分别为A012，A003-1，A044 ) ; Protease inhibitorcocktail( Roche 公司，批号11684817910) ; 蛋白免疫印迹法( Western blot) 抗体含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶( Caspase) -3，B 细胞淋巴瘤-2( Bcl-2) 及Bcl-2相关X 蛋白( Bax) ( CST 公司，批号分别为12768，2772， 2870) ; β-肌动蛋白( β-actin) 抗体( 中杉金桥公司，批号TA-09 ) ; DNA 断裂的原位末端标记法( TUNEL) 反应液( Roche 公司，货号11684817910) 。

1. 3 主要仪器RM6240BD 型多通道生理信号采集处理系统，HX-300 型小动物呼吸机( 成都泰萌科技有限公司) ; Pro Sound 5000 SSD-SV B 型超声仪( 日本Aloka 株式会社ALOKA 医用仪器有限公司) ; AU640 型全自动生化分析仪( 美国Olympus 公司) ; Image Pro Plus 6. 0 图像分析系统软件( 美国Media Cybernetics 公司) ; UV-2000 型紫外分光光度计( 上海尤尼柯公司) ; TGL-16 型台式高速冷冻离心机( 长沙湘仪离心机仪器有限公司) ; SPR-960 型全自动酶标仪( 美国Thermo 科技公司) ; VE186 型小型高通量垂直电泳槽VE180 及转移电泳槽( 上海天能公司) 。

2 方法

2. 1 分组及给药大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、丹蒌片组，假手术组22 只，模型组30 只，丹蒌片组28 只，预防性给药7 d，然后进行造模手术。其中假手术及模型组均以0. 5%的羧甲基纤维素钠灌胃，根据文献丹蒌片给药剂量选择0. 9 g·kg - 1，丹蒌片研碎后溶于0. 5%羧甲基纤维素钠制成混悬液，灌胃体积为10 mL·kg - 1。

2. 2 模型建立以10% 水合氯醛腹腔注射麻醉，经口腔行气管插管，连接小动物呼吸机，呼吸频率约70 次/min，潮气量7 ～ 8 mL，呼吸比1 ∶ 3，连接多通道生理信号采集系统，描记术前Ⅱ导联心电图。于左侧第3 或第3 肋间切口，钝性分离皮下组织及肌肉，打开心包膜，在左心耳下缘距肺动脉弓根部2 mm处结扎( 3 /8 圆针) ，进针深度约1 mm，宽度约2 mm，在冠脉前降支面置硅胶管连同冠脉用4 号医用缝合线一起结扎。50 min 后，剪去结扎线，连同硅胶管一同取出，进行再灌注。假手术组只在相应部位穿线不结扎。关闭胸腔，逐层缝合肌肉、皮肤，术后腹腔注射青霉素10 万单位预防感染。结扎成功标志: 结扎下方心肌颜色变灰白，同时心电图ST 段进行性抬高甚至弓背向上( 较正常至少抬高2 mm) 。复灌成功标志: 心脏颜色由灰白逐渐恢复正常，或30 min 内心电图ST 下降至少50%。造模前心率<350 次/min 者，未到规定时间死亡者及造模不成功者予以剔除。

2. 3 标本采集及指标检测

2. 3. 1 再灌注2 h 心肌酶、内皮功能检测每组取6 只大鼠，采集血清，以全自动生化分析仪检测LDH及CK-MB，以放射免疫法检测血清ET-1，紫外分光光度计检测血清NO 水平，紫外分光光度计检测心肌MDA，MPO 水平。

2. 3. 2 心肌梗死面积测定未取血大鼠于再灌注48 h 时处死，术前与取材前B 超检测心脏射血分数，从大鼠左肺静脉注射0. 5%依文思蓝约1. 5 mL，待大鼠口唇爪甲变蓝后摘取心脏，以冰盐水冲洗，擦干，置于- 20 ℃冻存20 min 后，沿结扎线以下切成等厚的4 ～ 5 片，放入1% TTC 溶液中，37 ℃ 孵育15 ～ 20 min，流水冲洗。非缺血区呈蓝色，缺血未梗死区呈砖红色，缺血区( area at risk，AAR) 为灰白区与砖红色区域之和，梗死区( area of necrosis，AN) 呈灰白色，放置于10%甲醛中室温固定24 h。然后用L2035AW Pioneer 数码照相机进行图像采集，以Version 6. 0 Media Cybernetics Image-Pro Plus 图像分析软件分别计算出梗死区、占缺血区面积的比例，缺血区占左室面积的比例。

2. 3. 3 Western blot 法检测心肌Caspase-3，Bax 及Bcl-2 蛋白表达每组取6 只大鼠分别检测心肌Caspase-3，Bax 及Bcl-2 蛋白表达。根据试剂说明书提取蛋白，BCA 法检测组织蛋白浓度，调整蛋白浓度，上样，根据蛋白目的分子量设定电泳条件，转膜，封闭，经一抗( 1 ∶ 1 000) ，二抗孵育，显色曝光，将显色后的图片扫描后，使用Gel Image system ver. 4. 00软件( 上海天能科技有限公司) 对图像进行灰度分析。以目的蛋白灰度值/β-actin 灰度值表示目的蛋白相对表达量。

2. 3. 4 TUNEL 法检测细胞凋亡每组取6 只大鼠做心脏石蜡切片，脱水，蛋白酶K 中孵育后避光条件下加稀释液，TUNEL 反应液，37 ℃放置1 h 转化converter-POD( POD) ，37 ℃ 烤箱中放置30 min，取出冲洗后加DAB，经苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯溶液透明，封片。于光学显微镜下观察，其中正常心肌细胞核呈蓝色，凋亡细胞核呈现出深浅不一的棕褐色。每张切片于凋亡细胞分布相同区域随机选取5 个高倍视野，计算平均每个视野中的凋亡细胞数占总细胞数的百分比，即为凋亡指数。

2. 4 统计学处理

采用SPSS 17. 0 统计软件。计量资料结果以珋x ± s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，P < 0. 05 为差异有统计学意义。

3 结果

3. 1 丹蒌片对再灌注2 h 心肌酶的影响与假手术比较，模型组及丹蒌片组LDH 及CK-MB 均显著升高( P < 0. 01) ; 与模型组比较，丹蒌片组LDH 及CK-MB 均明显降低( P < 0. 05) 。

3. 2 丹蒌片对再灌注2 h 内皮功能的影响与假手术比较，模型组血清ET-1 显著上升( P < 0. 01) ，NO 明显下降( P < 0. 05) ; 与模型比较，丹蒌片组ET-1 明显下降( P < 0. 05) ，而NO 明显上升( P<0. 05) 。

3. 3 丹蒌片对再灌注2 h 心肌组织氧化损伤的影响与假手术组比较，模型组MDA 及MPO 均显著升高( P < 0. 01) ; 与模型组比较，丹蒌片组MDA 及MPO 明显降低( P < 0. 05) 。

3. 4 丹蒌片对再灌注48 h 心脏射血分数及心肌梗死面积的影响与假手术组比较，模型组及丹蒌片组大鼠EF 值显著下降( P < 0. 01) ; 与模型组比较，丹蒌片组大鼠EF 值明显上升( P < 0. 05) 。假手术组无心肌梗死; 与模型组比较，丹蒌片组心梗/缺血面积比率显著下降( P < 0. 01) 。

3. 5 丹蒌片对再灌注48 h 心肌细胞凋亡指数影响与假手术比较，各组心肌凋亡指数均有显著升高( P < 0. 01) ; 与模型组比较，丹蒌片能显著降低心肌凋亡指数( P < 0. 01) 。

3. 6 丹蒌片对再灌注48 h 心肌Caspase-3，Bax 及Bcl-2 的蛋白表达的影响与假手术比较，模型组及丹蒌片组Caspase-3 表达明显升高( P < 0. 05，P<0. 01) ; 与模型比较，丹蒌片组Caspase-3 表达显著降低( P < 0. 01) 。与假手术比较，模型组及丹蒌片组Bax 表达明显升高( P < 0. 05，P < 0. 01) ; 与模型比较，丹蒌片组Bax 表达显著降低( P < 0. 01) 。与假手术比较，模型组及丹蒌片组Bcl-2 表达显著降低4 讨论MIRI 在临床可表现为再灌注心律失常，心肌无复流现象及心肌顿抑等，此类患者预后不良，心力衰竭、心源性猝死等发生机率较高。其发生机制复杂，至今还未完全明确，综合以前研究结果认为，氧自由基损伤、炎症反应、内皮功能障碍、钙超载等在MIRI 过程中相互影响，对心肌造成巨大损害。其中内皮功能障碍是动脉粥样硬化发生发展的始动环节，更是贯穿心肌缺血及再灌注损伤的全过程。内皮损伤后其分泌功能障碍，扩血管物质NO 减少，破坏了与缩血管物质ET 间的动态平衡，一方面内皮损伤促进血管收缩心肌缺血进一步加重; 另一方面造成内皮细胞的屏障作用破坏，为中性粒细胞和单核细胞及炎性细胞物质的浸润提供了场所，间接加重炎症反应。此外MIRI 发生时，缺血区心肌神经末梢释放大量儿茶酚胺，被单胺氧化酶分解后产生大量氧自由基( OFR) ，超过机体的清除能力，引发链式脂质过氧化反应，损伤细胞膜、细胞器乃至细胞内核酸，进而导致细胞凋亡甚至坏死，OFR对组织的损伤要远远大于缺血本身造成的`损伤。心肌细胞凋亡是MIRI 的最终环节，心肌缺血20 ～30 min 即可发生坏死并且具有不可再生的特性，故坏死周围的濒死心肌是临床治疗上争取的对象，阻止坏死周边心肌细胞凋亡成为治疗MIRI 的关键病理基础，文中提到的氧自由基、炎症因子、钙超载等共同对心肌细胞造成损伤导致细胞凋亡。Bax 和Bcl-2 是一对调节细胞凋亡的基因，Bax 促进细胞凋亡而Bcl-2 可抑制细胞凋亡，激活下一级Caspases酶系引起细胞的凋亡。其中Caspase-3 是细胞凋亡的主要执行者，活化后可分解细胞内的重要蛋白及底物，进而导致细胞凋亡。

本研究发现，丹蒌片在再灌注损伤发生的早期能促进MIRI 后内皮细胞NO 的释放，抑制缩血管物质的释放，修复受损的内皮分泌功能。MDA 反应体内自由基的多少，MPO 反应体内中性粒细胞的活动程度，丹蒌片能抑制心肌组织中MDA 及MPO 生成，改善自由基及炎症细胞对心肌的损伤。此外，丹蒌片在减少心肌梗死面积的同时还能有效阻止MIRI后心脏射血分数的下降趋势。有临床研究证实，低EF 值冠心病患者在冠脉旁路移植术前，应用主动脉内球囊反搏术可改善心功能后，能减少术后心梗、低心排血量等严重并发症的发生并能降低围术期病死率。另对择期PCI 的患者进行研究发现，白细胞计数，C 反应蛋白( CRP) 升高与EF 值降低有关，提示丹蒌片改善心脏EF 值可能与降低炎症反应的作用有关。本研究结果显示，丹蒌片可抑制心肌促凋亡蛋白Bax，Caspases-3 的表达，提高抑制凋亡基因蛋白Bcl-2 的表达，丹蒌片可能通过抑制细胞凋亡保护梗死区周围的心肌，从而降低心肌梗死区与缺血区比例，保护再灌注损伤的心脏。现代药理研究表明，丹蒌片成分中黄芪、丹参、葛根、川芎等诸多药物提取物均有广泛的心血管效应，采用生物信息学方法推测它们可能通过环加氧酶2，瘦素蛋白，一氧化氮合酶3 及低密度脂蛋白受体起作用，但尚缺乏相关实验验证，这些已知化学成分协同作用于心血管系统，从多途径、多靶点发挥MIRI 后对心脏的保护作用。

丹蒌片具有活血化痰、宽胸通阳之效，在临床应用中对稳定型心绞痛、支架植入术后患者及非血运重建急性冠脉综合征患者均有确切的疗效，亦有临床研究表明丹蒌片具有一定的降血脂和稳定斑块作用，加之其降血压和减慢心率的作用共同组成缓解临床症状的基础。MIRI 是一个复杂的病理过程，心肌细胞坏死及凋亡是心肌组织学损害的最终结果，该过程有大量信号通路参与，损害通路和救助通路交织成网状。本实验探索了丹蒌片治疗MIRI 机制，至于其对信号通路及其相关调控蛋白基因的影响有待于进一步研究，明确其作用机制，为丹蒌片防治MIRI 提供基础数据和实验支撑。