人趋化因子MIP-lα的克隆及其基因工程菌的构建

以下是小编为大家收集的人趋化因子MIP-lα的克隆及其基因工程菌的构建，本文共5篇，欢迎参阅，希望可以帮助到有需要的朋友。

篇1：人趋化因子MIP-lα的克隆及其基因工程菌的构建

人趋化因子MIP-lα的克隆及其基因工程菌的构建

通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)克隆并构建了去掉信号肽的人趋化因子巨噬细胞炎性蛋白(Macrophage inflammatory protein-1α, MIP-lα)基因的.工程菌,并对该基因的结构进行了分析. 结果表明,MIP-lα属于4Cys CC趋化因子,具有4个半胱氨酸,含有…CC……C……C……结构,该蛋白的4个保守半胱氨酸形成了两对功能必需的二硫键.

作 者：王伟权 曹锦萍 张继栋 刘季平吕培涛 WANG Wei-quan CAO Jing-ping ZHANG Ji-dong LIU Ji-ping L(U) Pei-tao  作者单位：王伟权,WANG Wei-quan(仲恺农业工程学院,生命科学学院,广东,广州,510225)

曹锦萍,吕培涛,CAO Jing-ping,L(U) Pei-tao(仲恺农业工程学院,农业与园林学院,广东,广州,510225)

张继栋,ZHANG Ji-dong(西南大学,生命科学学院,重庆,400715)

刘季平,LIU Ji-ping(华南农业大学,园艺学院,广东,广州,510642)

刊 名：仲恺农业工程学院学报 英文刊名：JOURNAL OF ZHONGKAI UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND TECHNOLOGY 年，卷(期)： 22(1) 分类号：Q78 关键词：趋化因子   MIP-lα   艾滋病病毒  

篇2：耐热过氧化氢酶基因工程菌的构建及其发酵条件

耐热过氧化氢酶基因工程菌的构建及其发酵条件

利用PCR扩增技术以嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001染色体DNA为模板,扩增得到嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶编码基因perA.再与经EcoR Ⅰ酶切的温控表达载体pBV220连接,构建重组质粒,并转化宿主大肠杆菌JM109,得到耐热过氧化氢酶基因工程菌,然后对该工程菌在LB培养基和半合成培养基中的`发酵条件进行了优化.结果表明:在LB培养基中,诱导时期和酶合成最佳诱导时间均为5 h,最大产酶量达到72.9 U/mL;在半合成培养基中,于30℃培养4 h,再于42℃诱导培养6 h,产酶量最高达到131 U/mL.

作 者：段绪果 沈微 李艳丽 饶志明 唐雪明 方慧英 刘吉泉 诸葛健 DUAN Xu-guo SHEN Wei LI Yan-li RAO Zhi-ming TANG Xue-ming FANG Hui-ying LIU Ji-quan ZHUGE Jian  作者单位：江南大学,工业生物技术教育部重点实验室,江苏,无锡,214036 刊 名：食品与生物技术学报  ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 25(2) 分类号：Q78 关键词：耐热过氧化氢酶   基因工程菌   温控表达载体   发酵条件  

篇3：人趋化因子受体CCR6的克隆、表达及其功能分析

人趋化因子受体CCR6的克隆、表达及其功能分析

目的 构建人趋化因子受体6(CCR6)cDNA序列的真核表达载体,并在HEK293细胞中表达,为研究CCR6生物学功能和筛选CCR6拮抗剂奠定基础.方法 采用RT-PCR方法从人扁桃体克隆CCR6受体的DNA片段,并将该片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CCR6;将该质粒pcDNA3.1(+)-CCR6转染HEK293细胞,用流式细胞术检测转染pcDNA3.1(+)-CCR6质粒的HEK293细胞;采用体外趋化实验、钙流实验,验证转染pcDNA3.1(+)-CCR6质粒的HEK293细胞表面表达的CCR6的.生物学活性.结果 经RT-PCR获得了编码人CCR6受体的DNA片段,构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CCR6;转染HEK293细胞,经流式细胞仪检测、趋化实验、钙流实验证实,表达CCR6的HEK293细胞具有趋化因子受体CCR6的生物学活性.结论 重组人趋化因子受体CCR6克隆成功,并在HEK293细胞中获得了表达,为研究CCR6的生物学功能及筛选CCR6拮抗剂奠定了基础.

作 者：沈大斌 龚小云 顾涛 罗福康 郑红  作者单位：第三军医大学西南医院综合实验研究中心,重庆 400038 刊 名：重庆医学  ISTIC PKU英文刊名：CHONGQING MEDICINE 年，卷(期)：2006 35(18) 分类号：Q785 关键词：人趋化因子受体6   pcDNA3.1(+)   趋化实验   钙流实验   克隆  

篇4：人hole基因的克隆和序列分析

人hole基因的克隆和序列分析

目的 克隆人的hole基因,并进行生物信息学分析.方法 以胚胎心脏cDNA文库为模板,进行PCR扩增得到hole基因的.ORF.并进行亚克隆入PMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,用Xho1进行酶切和测序鉴定阳性克隆.利用Internet和GeneBank数据库对测序结果正确的hole基因进行生物信息学分析. 结果克隆了hole基因,测序结果正确;生物信息学分析表明, hole基因开放读码为960 bp,编码319个氨基酸;同源性分析表明,人的hole与鼠、鸡hole蛋白具有高度同源性.多种组织的半定量RT-PCR研究表明,该基因在心脏、肝脏、肺、脑、肾脏、脾脏、胰脏均有表达,其心脏表达最高. 结论成功克隆hole基因,对其功能进行了初步预测,为进一步的功能研究打下基础.

作 者：姚峰 周军媚 王佐 陈春芳 吴端生 刘鑫 余坚  作者单位：姚峰(南华大学,实验动物学部,湖南,衡阳,421001;南华大学,心血管病研究所)

周军媚(南华大学,生命科学与技术学院)

王佐(南华大学,心血管病研究所)

陈春芳,吴端生,刘鑫,余坚(南华大学,实验动物学部,湖南,衡阳,421001)

刊 名：南华大学学报（医学版） 英文刊名：JOURNAL OF UNIVERSITY OF SOUTH CHINA(MEDICAL EDITION) 年，卷(期)： 37(3) 分类号：Q785 关键词：hole基因   PCR   克隆   序列分析  

篇5：牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定

牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定

肠激酶(enterokinase, EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastoris SMD 1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、rEKL (recombinant enterokinase light chain, rEKL) 纯化、N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、N端15个氨基酸序列与文献报道一致. 图5 参17

作 者：李德华 苟兴华 胡海洋 徐琦 刘忠荣 吴洽庆 余晓东 LI Dehua GOU Xinghua HU Haiyang XU Qi LIU Zhongrong WU Qiaqing YU Xiaodong  作者单位：李德华,LI Dehua(重庆师范大学生命科学院,重庆,400047;成都地奥制药集团有限公司,成都,610041)

苟兴华,胡海洋,刘忠荣,GOU Xinghua,HU Haiyang,LIU Zhongrong(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041)

徐琦,XU Qi(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041;四川大学化工学院,成都,610065)

吴洽庆,WU Qiaqing(成都地奥制药集团有限公司,成都,610041;中国科学院成都生物研究所,成都,610041)

余晓东,YU Xiaodong(重庆师范大学生命科学院,重庆,400047)

刊 名：应用与环境生物学报  ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY 年，卷(期)：2006 12(6) 分类号：Q78 关键词：肠激酶(enterokinase,EK)   甲醇酵母(Pichia pastoris)   高密度发酵